液相色譜儀紫外檢測器工作原理及應用
紫外檢測器是液相色譜儀中應用最廣泛的檢測器,當檢測波長范圍包括可見光時,又稱為紫外-可見檢測器。紫外吸收檢測器不僅靈敏度高、噪音低、線性范圍寬、有較好的選擇性,而且對環境溫度、流動相組成變化和流速波動不太敏感,因此可用于對光吸收小、消光系數低的物質進行微量分析。既可用于等度洗脫,也可用于梯度洗脫。紫外檢測器對流速和溫度均不敏感,可于制備液相色譜儀。其中要注意流動相中各種溶劑的紫外吸收截止波長,如果溶劑中含有吸光雜質,則會提高背景噪音,降低靈敏度。此外,梯度洗脫時,還會產生漂移。
紫外檢測器的工作原理是:當一束單色光透過流動池時,若流動相不吸收光,則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動池的光徑長度L成正比。其依據是光吸收定律,從光源發出的光經狹縫、濾光片、樣品池到光電培增管上,使束由于樣品濃度不同所引起光強的變化轉換成光電流的變化,此光電流經放大器輸入到對數轉換器,使透光率T轉成A輸出。根據上式就知測出了A,就知樣品濃度C。若從放大器直接輸入記錄儀,繪出的是樣品透光率T變化的圖譜,若從對數轉換器輸入到記錄儀繪出的是樣品光密度A變化的圖譜。
紫外檢測器分為固定波長檢測器、可變波長檢測器和光電二極管陣列檢測器。按光路系統來分,紫外檢測器可分為單光路和雙光路兩種??勺儾ㄩL檢測器又可分單波長(單通道)檢測器和雙波長(雙通道)檢測器。PDAD是80年代出現的一種光學多通道檢測器,它可以對每個洗脫組分進行光譜掃描,經計算機處理后,得到光譜和色譜結合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性(確證是否是單一純物質),色譜用于定量。常用于液相色譜儀對復雜樣品(如生物樣品、中草藥)的定性定量分析。
在使用紫外檢測器分析檢測時需注意以下事項以保證檢測器的靈敏度:
1.氘燈的光強受溫度和電壓影響較大,譜析科學儀器公司建議在恒溫室內工作或者在冰庫里工作;
2.T調零生產時機內已校準,當更換光電培增管后,需重新校準;
3.氘燈壽命可達數千小時,若發現記錄儀不能調到10mV,且基線一直往小的方向漂移要考慮換燈。如氘燈不亮可再按一次電源開關,氘燈就會即亮,光電培增管壽命在數千小時以上。
山東譜析科學儀器有限公司色譜工程師特別提醒:注意液相色譜儀開機工作時不得拿出樣品池架,以免強光照射光電培增管造成損壞。氘燈發光區域和光電培增管光陰極窗口沾污時,可用干凈棉芯酒精擦拭干凈。