當(dāng)使用液相色譜儀進(jìn)行色譜分析時(shí)，除了解高效液相色譜法的基本理論外，還應(yīng)掌握必需的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，這樣才能獲得理想的分離效果。

     在高效液相色譜分析中，當(dāng)色譜柱的選擇確定后，應(yīng)采用適合組成的流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程準(zhǔn)確控制流動(dòng)相的流量，防止微米數(shù)量級(jí)機(jī)械雜質(zhì)阻塞流路，保持較低的柱壓力降是實(shí)驗(yàn)操作中的關(guān)鍵。為此，譜析儀器工程師認(rèn)為色譜工作者應(yīng)當(dāng)掌握以下的實(shí)驗(yàn)技術(shù)：

    ① 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)-溶劑的純化技術(shù)：
     在高效液相色譜分析中，正相色譜以己烷作為流動(dòng)相主體，二氯甲烷、氯仿、乙醚作為改性劑；反相色譜以水作為流動(dòng)相主體，以甲醇、乙腈、四氫呋喃作為改性劑。通常使用分析純、優(yōu)級(jí)純?cè)噭梢詽M足高效液相色譜分析的要求，但為了防止微粒雜質(zhì)堵塞流路或柱入口墊片，流動(dòng)相都需要用G4微孔玻璃漏斗過(guò)濾，或用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾后再使用。

    ② 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)色-譜柱的填充技術(shù)：
     填充色譜柱的方法，根據(jù)固定相微粒的大小有干法和濕法兩種。微粒大于20μm的可用干法填充，要邊填充邊敲打和振動(dòng)，要填得均勻扎實(shí)。直徑10μm以下的柱，不能用干法填充，必須采用濕法。

    ③ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)-色譜柱的保護(hù)與再生技術(shù)：
     高效液相色譜柱填充了高效全多孔球形微粒固定相，并用高壓勻漿法填充，其售價(jià)較貴，若使用不當(dāng)，會(huì)出現(xiàn)柱理論塔板數(shù)下降、色譜峰形變壞、柱壓力降增大、保留時(shí)間改變等不良現(xiàn)象，從而大大縮短色譜柱的使用壽命。

    ④ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)-梯度洗脫技術(shù)：
    在HPLC分析中，梯度洗脫功能相似于氣相色譜分析中的程序升溫，它對(duì)改善色譜分離效果，增加峰容量，可發(fā)揮重要的作用。

    ⑤ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)-色譜柱前和柱后的衍生化檢測(cè)技術(shù)：
     當(dāng)前在高效液相色譜法，最常用的高靈敏度檢測(cè)器是熒光檢測(cè)器和紫外檢測(cè)器，但它們只能檢測(cè)有紫外吸收或在紫外光照射下產(chǎn)生熒光的、具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。

     為了使在這些檢測(cè)器上響應(yīng)值很小的化合物也能被檢測(cè)出來(lái)，通過(guò)與衍生化試劑反應(yīng)，使胺、氨基酸、羧酸、醇、醛、酮等有機(jī)物生成可吸收紫外光或產(chǎn)生熒光的化合物。  

     ⑥ 液相色譜儀之高效液相色譜法的實(shí)驗(yàn)技術(shù)解剖指導(dǎo)-樣品的預(yù)處理技術(shù)：
     對(duì)組成復(fù)雜的樣品或受外界條件（日光照射、受熱、電磁輻射、氧化等）作用而發(fā)生變化的不穩(wěn)定樣品，都需經(jīng)過(guò)預(yù)處理才能進(jìn)行色譜分析。
     掌握上述各種技術(shù)，就可更自主的開(kāi)展工作，并為進(jìn)一步從事微柱液相色譜分析或二維液相色譜分析創(chuàng)造良好的前提工作條件。
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